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1. 從液氮或-80℃冰箱中取出凍存細胞，馬上放入37℃水浴鍋中，并不時地攪拌，使細胞在2min內快速解凍。

2. 待其融化之后，用75%酒精擦拭冷凍管外部，在超凈臺中打開凍存管蓋子，吸取細胞懸液加入至含有完全培養基的離心管中，低速離心5min后棄去上清液，再加入適量完全培養基輕輕吹打，使細胞重懸。

3. 將重懸后的細胞緩慢加入到含有培養液的培養瓶，十字輕晃細胞培養瓶令細胞分布均勻，然后放入恒溫培養箱中進行培養。

1. 整個過程應在超凈臺中進行，注意嚴格使用無菌操作技術。

2. 解凍過程務必快速，如果復溫速度太慢，會造成細胞損傷。

3. 凍存管放入水浴中注意用鑷子夾住細胞凍存管并在水浴中不時晃動，使其受熱均勻，并防止水浴時水進入細胞凍存管內造成污染。

4.打開細胞凍存管之前要用酒精棉球將凍存管消毒并晾干。

5.液氮操作有一定的危險性，打開液氮罐取出細胞凍存管時，戴上防護眼鏡。