中文版
English
加入收藏
核酸提取—瓷珠法
核酸是生物界一類非常重要的生物大分子。它在生物繁殖、發育、維持、衰老和死亡等所有生命活動中發揮著重要作用。目前，核酸已成為生物化學、遺傳學等生命相關學科的研究熱點。核酸研究的首要前提是能夠將其從眾多復雜的生物大分子中提取出來，并進行一定程度的純化，以供相應的科學研究和實際應用。
實驗原理 在帶電荷的鹽離子（如Na+）的作用下，帶負電荷的磷酸基團在解離的鹽離子和羧基之間形成離子橋，使DNA特異性地吸附在羧基磁珠表面。在去除PEG和鹽后，添加水性分子將快速充分地水化DNA，解除三者之間的離子相互作用，使吸附在磁珠上的DNA被提取出來。
實驗步驟 01 配置蛋白酶K溶液 按照配置比例在一定量蛋白酶K干粉中加入一定量的去離子水，然后進行瞬時離心或者反復搖晃震蕩使其完全溶解。短期使用可于4℃保存，長期儲存需置于-20℃。 02 樣本裂解 使用移液槍將樣本加入離心管中，并且加入裂解緩沖液以及蛋白酶K溶液。然后再加入結合緩沖液，其中包含了磁珠用于吸附DNA。反復震蕩混勻，使樣本裂解且DNA結合在磁珠上。 03 磁鐵吸附 將離心管放置在磁力架上，使磁珠被磁鐵吸附到離心管的管壁上，然后用移液槍吸附上清并棄去，保留磁珠。 04 洗脫DNA 用移液槍在離心管中加入洗滌緩沖液，并且反復搖晃震蕩使磁珠重新懸浮，然后將離心管放置在磁力架上，吸附磁鐵，吸取上清并棄去。重復洗滌兩次，用移液槍移取上清液于另一離心管中，此時上清液里即為DNA。 05 其他提取法 以上操作為手動提取，除此之外還可以選擇使用核酸提取儀進行DNA提取。大致操作步驟為：將第2步中經過裂解緩沖液以及蛋白酶K溶液處理過的樣本加入深孔板當中，然后將深孔板放進提取儀，配合磁棒套自動完成DNA提取過程。
以上為內容導讀，完整內容請點擊下方圖標下載
資料下載
