免疫學三大工具—免疫組化（IHC）
免疫組化是利用抗原與抗體的特異性結合，通過免疫反應和顯色反應來準確定位組織和細胞中的抗原，從而進行形態與功能結合的研究，對于病理學領域具有十分重要的意義。
流程
實驗步驟
1
切片
將包埋好的組織置于石蠟切片機上進行切片，石蠟切片厚度5 μm，切好的組織置于40℃水中展平，隨后用玻片撈出，置于烘箱60℃，烤片30min。
注意：對骨或者皮膚這些易脫片的組織，可適當延長烤片的時間。
2
脫蠟至水
目的：為了脫去組織石蠟，讓組織水化，易于孵育。
將玻片連同架子依次放入二甲苯、酒精中進行脫蠟，二甲苯脫蠟三缸，每缸10min。100%，85%，70% 酒精依次浸泡10min。
注意：可根據氣溫適當延長或縮短時間。
3
抗原修復
目的：使抗原位點暴露出來
材料：檸檬酸緩沖液
清水沖洗玻片，然后連同架子放入檸檬酸緩沖液中，在微波爐中煮沸，然后室溫冷卻。
4
封閉
目的：封閉非特異性結合位點
材料：免疫組化筆
室溫冷卻后將檸檬酸倒掉，并在染色缸中用PSB清洗玻片。用免疫組化筆在玻片上畫圈防止試劑流出，滴加封閉血清，于恒溫箱中37℃孵育30min。
5
一抗二抗孵育
材料：PBS緩沖液
將載玻片取出，倒去血清，滴加一抗，4℃冰箱保存過夜。取出后用PBS清洗玻片。然后同樣操作依次滴加二抗、SABC、顯色劑、并每次用PBS洗滌玻片。
6
復染
材料：蘇木素染色液
取玻片浸泡于蘇木素染色液中，一般動物組織染30s，植物組織染3-5min，蒸餾水水洗，1%鹽酸酒精中脫色，浸泡水洗。
注意：具體復染時間根據染色效果進行調整。
7
脫水
將復染結束的玻片依次浸泡于70%，85%，100%酒精中梯度脫水，每缸3min；二甲苯三缸，每缸2min。
8
封片
材料：中性樹脂
最后中性樹脂滴在玻片組織旁進行封片，通風櫥晾干，觀察實驗結果及拍照。
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