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細胞培養——無菌操作技術

在我們生活的環境中微生物可以說是無處不在,而微生物實驗,特別是各類動植物細胞培養,當我們的樣本被某種其他微生物沾染,發現的早或許還有補救,但操作起來也比較繁瑣,并且處理過程還需要避免二次污染,這操作難度可想而知了。倘若發現的稍微晚了一些,該樣本就只能尸骨無存了,作廢處理。


因此對于細胞培養成功操作最基本的要點是:任何與細胞接觸的物品必須是無菌的。無菌技術在理論上是很簡單的:阻止無菌的、未被污染的物質或物品與任何有菌的、被污染的物體相接觸。任何直接或間接地與培養相接觸的物品必須無菌。理想化的情況是所有無菌操作都應該在一個層流式超凈臺中進行。



保證無菌操作中需用到的洗手液、75%乙醇、95%乙醇、實驗室工作服、手術用乳膠手套。




無菌操作前用洗手液充分刷洗手。不同的需求選擇適當的實驗工作服。為保證無菌條件,穿好實驗服,戴乳膠手套后還需在實驗開始前以及無菌操作過程中,還應經常地用75%酒精消毒戴著手套的雙手。


實驗完成后脫掉防護手套后徹底沖洗雙手。

細胞培養實驗中樣品處理的全過程都應該在一個潔凈的工作間內進行。層流式潔凈間為無菌操作提供了一個最適的可控制環境。對將參與無菌操作的各種物品的工作區域要進行清潔。


使用前后要用75%乙醇、紫外輻射或其他途徑處理工作面。

無論怎樣,當所用物品介入潔凈工作間時都要用消毒劑處理。按照從潔凈到污物的順序合理安排各種物品,以防污染物件對清潔物件的交叉污染。任何細小的污染物應立即投入到消毒盤內。


無菌工作完成后,及時清理各種較大的污物或其他要想處理的廢棄物,并放置在指定的包裝袋或盤內,然后高壓滅菌。

與相關物品接觸的器械的關鍵部分浸泡于95%乙醇中。從乙醇中小心取出器械時,切勿碰觸其潔凈部位。待乙醇自然揮發后,持器械在噴燈火焰上通過,去除殘留的乙醇。


器械使用前,切勿碰觸任何未經消毒的物件,冷卻10s 后再用。


警告:

1

75%、95%乙醇都是是易燃品,乙醇容器要置于一定范圍的安全處而遠離明火。

2

器械使用完畢后重新浸泡在乙醇消毒劑中,以備使用。

3

手握接種環柄,于中間部位開始在酒精燈火焰上前后移動燒灼金屬圈,直至出現橘紅色,然后冷卻至室溫(約10s) ,待用。

4

完成接種后,重新燒灼接種圈,清除殘余的生物活性物質。冷卻至室溫,放置備用。


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